廣州艾基生物技術(shù)有限公司
Guangzhou IGE Biotechnology Co., Ltd.
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技術(shù)支持
致力于引進國外先進技術(shù)，為廣大科研工作者和醫(yī)療機構(gòu)提供高質(zhì)量 的科研技術(shù)支持 。
質(zhì)粒上有兩個polyA序列，一個是BGHpA,一個是SV40pA，這兩個有什么區(qū)別？
BGHpA是牛生長因子polyA（BGH聚腺苷酸化信號序列）：可以有效終止轉(zhuǎn)錄和mRNA聚腺苷酸化的牛生長因子(BGH)聚腺苷酸化信號序列，多聚腺苷酸尾（或聚A尾）保護mRNA，免受核酸外切酶攻擊，并且對轉(zhuǎn)錄終結(jié)、將mRNA從細胞核輸出及進行翻譯。而SV40pA是猴空泡病毒polyA（SV40早期poly-A信號序列）以及SV40晚期poly (A)序列。SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,簡稱PolyA)序列是有轉(zhuǎn)錄終止作用和使轉(zhuǎn)錄的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信
我想用真核細胞表達我的基因片段，假如我的基因片段插在多克隆位點上，但是多克隆位點與真核啟動子之間隔了一個原核的T7啟動子，就是我的目的基因與啟動子之間隔了一個原核的啟動子，這樣我的基因還能表達嗎？
某些真核表達載體上同時存在CMV啟動子和T7啟動子例如：在pcDNA3.1/myc-His系列載體中CMV啟動子位于209~863，而T7啟動子則位于863~882，這樣目的基因就可以在含有T7 RNA 聚合酶基因的宿主菌表達。在宿主細菌細胞或體外轉(zhuǎn)錄中，質(zhì)粒DNA可以利用T7啟動子驅(qū)動基因表達，而在哺乳動物細胞中，轉(zhuǎn)基因表達由CMV啟動子驅(qū)動。而T7 啟動子在這個商業(yè)化載體pCDNA3.1(+)中常被用于測序。所以，若是使用真核載體pCDNA3.1(+)或者pCDNA3.1(-)的話，一般情況下是不會影響基因的表達。
請問你們的細菌有T7 polymerase可以直接在該細菌上表達克隆基因的嗎？
具有T7 polymerase的表達菌株，本司常備有BL21(DE3)和BL21(pLysS）兩種表達菌株： BL21(DE3)：表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的非毒性基因。 BL21(pLysS）：pLysS含有表達T7溶菌酶的基因，適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。
密碼子優(yōu)化過的基因，艾基生物是否還提供蛋白表達服務？
艾基生物同時可為合成的基因提供蛋白表達及純化服務。艾基生物提供四大蛋白表達系統(tǒng)：原核蛋白表達系統(tǒng)、酵母蛋白表達系統(tǒng)、桿狀病毒-昆蟲細胞蛋白表達系統(tǒng)及哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng)。若需要訂購蛋白表達服務，會有相關(guān)業(yè)務員跟進關(guān)于蛋白純白條件摸索以及蛋白純化等等工作以及報價。
艾基生物是否免費提供自備載體驗證服務？
在艾基生物訂購質(zhì)粒構(gòu)建服務，可為您免費提供一個反應（正常情況下可測序驗證插入的MCS區(qū)域）的載體測序驗證服務。若測序驗證由于您提供的樣品或樣品信息出現(xiàn)問題時，需要加測反應，則有您承擔加測費用。
提供的質(zhì)粒量太少了，能不能多提供一些？
客戶在下訂單的時候可以自行標注多所需要發(fā)貨量，我們盡量滿足合理范圍內(nèi)所有要求
如何使用艾基生物基因合成或克隆構(gòu)建交付的項目樣品，交付的項目樣品類型都有哪些？
如您在艾基生物訂購基因合成、克隆構(gòu)建、定點突變等質(zhì)粒構(gòu)建的項目，將會為您提供經(jīng)測序驗證的質(zhì)粒1-2ug，含重組質(zhì)粒的新鮮菌液和甘油菌。 A. 質(zhì)?！?樣品形式為液體,含有少量的Tris-Hcl,不影響測序和酶切。一般高拷貝載體濃度在100-250ng/μl，而低拷貝載體濃度在50-100ng/μl，具體見標簽上注明的濃度，提供總量約1~2ug?！?使用方法：可以直接進行酶切和測序，也可進行轉(zhuǎn)化（用量為0.5 ul~1 ul）?！?保存：建議-70℃長期保存。B. 新鮮菌液· 樣品形式為新鮮菌液（不含甘油），可接種于新鮮的培養(yǎng)液中37℃過夜培養(yǎng)后直接提取質(zhì)粒?！?菌株為Match-T1,JM109,DH10B，該菌株為非甲基化缺陷型菌株，使用限制性內(nèi)切酶處理樣品時，…
基因合成服務提供的數(shù)據(jù)報告包含哪些文件，每個文件需要使用什么軟件打開？
您所收到的基因合成服務數(shù)據(jù)報告是ZIP格式的壓縮文件，可以使用Winrar(4.0以上版本)打開，數(shù)據(jù)報告一般含有7類文件，包含測序原始圖譜、序列比對文件和質(zhì)粒圖譜及序列。分別為： 1. *.abl 文件為 ABI 3730 序列圖譜，是測序結(jié)果的峰圖文件，可使用 Chromas 或其它相關(guān)軟件查看。 Chromas 軟件可在以下地址免費下載： http://www.technelysium.com.au/chromas_lite.html 2. *.seq 文件為*.abl 峰圖文件對應的序列文件，可以使用 TXT 文檔等相關(guān)軟件打開。 3. *.cm5 文件為您的質(zhì)粒圖譜，該文件必須使用 Clone Manager 5 及以上版本查看及編輯。 4. 如果您無法使用 Clone Manager，我們?yōu)槟峁┝艘粋€*.gbk 文件，該文件為 genbank 格式…
在大腸桿菌表達系統(tǒng)中，哪種終止密碼子具有偏好性？在哺乳動物系統(tǒng)中呢？
在大腸桿菌中，TAG很少用；經(jīng)常使用的是TAA；TGA也可以。在哺乳動物中，TGA的使用頻率高于TAA和TAG。相對于哺乳動物和大腸桿菌之間的不同，密碼子使用表在哺乳動物不同有機體間的區(qū)別不是很大。
如想在兩種不同的宿主中表達目的蛋白，艾基生物是否能夠在兩種宿主中進行優(yōu)化？
可以。我們的優(yōu)化工具可以幫助您同時針對兩個不同宿主物種進行基因優(yōu)化。該工具可同時載入兩個宿主的密碼子偏向性和順勢作用元件等優(yōu)化參數(shù)，雙宿主優(yōu)化算法會搜尋兩個宿主表達的平衡點，以求在兩個宿主中都可以得到令人滿意的蛋白表達量。但是在兩個宿主物種的親緣關(guān)系比較遠等情況下，雙宿主基因優(yōu)化則很有可能在兩個宿主中都得不到理想的優(yōu)化結(jié)果。如果您在您的雙宿主優(yōu)化結(jié)果中發(fā)現(xiàn)了CAI小于0.80，大量順勢作用元件沒有被過濾掉，或其他可能影響基因表達的現(xiàn)象，我們推薦您針對兩個宿主分別使用我們的單一宿主優(yōu)化方法。
如需基因優(yōu)化，我需要提供哪些信息？
若需基因優(yōu)化，我們需要您提供如下信息：a.被優(yōu)化的基因序列或者蛋白序列；b.優(yōu)化的宿主（物種，例如：人、小鼠、茄子等等）；c.基因兩端需添加的酶切位點或者基因內(nèi)部需避免的酶切位點；d.是否需要特定的終止密碼子；e.是否需添加Kozak序列，對于哺乳動物表達系統(tǒng)我們一般建議您添加Kozak序列。
密碼子優(yōu)化有必要嗎？
對于用于蛋白表達的基因來說，多數(shù)情況下是有必要的。如真核生物的基因需要在原核生物中表達。由于真核生物的密碼子偏好和原核生物有很大不同，對基因進行密碼子優(yōu)化將顯著提高表達效率。
構(gòu)建后的質(zhì)粒以及項目相關(guān)信息，艾基生物會保留嗎？會保留多久？
您的實驗數(shù)據(jù)、質(zhì)粒及甘油菌艾基生物將為您保存1個月，請您拿到樣品后盡快驗證實驗結(jié)果。
訂購定點突變項目，需要提供什么信息？為什么突變一個點，收費會比目錄價更貴？
需提供改造前載體的相關(guān)信息（質(zhì)粒圖譜、全序列、多克隆位點、克隆位點上下游50 bp序列的驗證結(jié)果），并注明突變的氨基酸序列以及突變位點。若突變的序列較長或無適合的酶切位點，會按照克隆長度進行分析報價，相對而已收費比目錄價更貴一些。
訂購克隆構(gòu)建項目，需要提供什么信息？
需要您明確告知克隆要求，并確保提供信息的正確性。需提供改造前載體的相關(guān)信息（質(zhì)粒圖譜、全序列、多克隆位點、克隆位點上下游50 bp序列的驗證結(jié)果），并注明使用時是否有特殊要求；模板相關(guān)信息（模板類型、模板序列、模板驗證結(jié)果）；構(gòu)建后的質(zhì)粒信息（構(gòu)建后質(zhì)粒命名、構(gòu)建后質(zhì)粒序列）
艾基生物可以將合成的基因克隆至我指定的載體嗎？
可以。但如非艾基生物常備的其它的載體需要由客戶自己提供。如果您需要將合成的基因克隆到您指定的載體上，需要您提供載體相關(guān)信息（質(zhì)粒圖譜、全序列、多克隆位點、克隆位點上下游50bp序列的驗證結(jié)果），若無法提供測序結(jié)果，我司會提供測序驗證的服務，我們會根據(jù)目的基因的長度，載體構(gòu)建的難度加收部分亞克隆費用（除部分免克隆費的載體）。
pGSI載體和其他免費克隆載體什么區(qū)別？在什么情況下，艾基生物建議使用pGSI載體？
艾基生物基因合成服務為客戶免費提供pGSI，pBluescript II SK(-)，pUC19，pUC57，pcDNA3.1(+) 5種克隆載體。pGSI是由pBluescript II SK改造過的， 除去了它的多酶切克隆位點，只保留SmaI、EcoRV、XhoI 3種克隆位點。如客戶對克隆載體和克隆位點沒有特殊要求，我們將會默認把目的基因片段平端克隆到pGSI的SmaI位點。如果客戶要求避免一些載體上常用的酶切位點以方便后續(xù)的亞克隆需求，我們可保證構(gòu)建后的質(zhì)粒上不出現(xiàn)指定的酶切位點。
艾基生物能合成多長的基因？
沒有長度限制，艾基生物可為您合成長達10 kb及以上的基因序列。且艾基生物已挑戰(zhàn)合成成功的基因有：長達30 kb的基因（分段組裝）；>90%高GC含量或<10%高AT含量的基因；重復片段基因；強二聚體結(jié)構(gòu)的基因；含50多個連續(xù)腺嘌呤的基因 (aaaaaaa……)等幾千種復雜基因。
艾基生物基因合成服務的優(yōu)勢有哪些？
艾基生物基因合成服務主要競爭優(yōu)勢：①基因合成平臺：可以合成任何基因，包括高度重復（正向/反向）序列、AT/GC rich 序列、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、連續(xù)單一堿基重復等富含特殊結(jié)構(gòu)的復雜基因、毒性基因等②特殊的克隆策略：采用無縫隙克隆組裝技術(shù)，可將合成的基因插入到任意載體的任一位置。③客戶信息安全保證：艾基生物基因合成周期短，特有的安全制度保證客戶的信息安全，公司嚴格按照與客戶簽定的基因合成服務協(xié)議和保密合同執(zhí)行服務；④良好的客戶信任度：服務質(zhì)量可靠，提供DNA測序結(jié)果，保證所合成的基因序列100%準確。艾基生物為客戶合成的許多基因以及提供的密碼子優(yōu)化后序列合成，在其發(fā)表的高水平文章中得到引用。
與傳統(tǒng)PCR克隆相比，基因合成有什么優(yōu)點？
基因合成有如下優(yōu)點：①專業(yè)的密碼子優(yōu)化技術(shù)提高了蛋白的表達量及可溶性；②成本效益低，通過普通PCR克隆方法構(gòu)建組織特異性cDNA文庫是費時費錢的；③基因合成獲得的基因無突變、準確，普通PCR產(chǎn)生非預期結(jié)果的可能性大，從而影響后續(xù)實驗的進行；④不需要依賴模板以及載體酶切位點的限制。
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